@MASTERSTHESIS{ 2019:1469616923,
 	title = {Clonagem e expressão do gene da quitinase de Anopheles gambiae em Pichia pastoris},
 	year = {2019},
 	url = "https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7286",
 	abstract = "Sendo integrante da classe das glicosídeo-hidrolases, as quitinases (EC 3.2.1.14) atuam na clivagem de sítios randômicos da molécula de quitina através de hidrólise, formando cadeias de quitooligossacarídeos. Estruturalmente possuem subdomínios catalíticos que a auxiliam na ligação ao seu substrato insolúvel e ruptura da conformação cristalina. O potencial enzimático dessas enzimas compreende principalmente o controle biológico de fito-patógenos fúngicos e insetos vetores, organismos onde a quitina é um componente estrutural da parede celular ou exoesqueletos. Entretanto, sua aplicabilidade se estende à síntese de polissacarídeos artificiais, isolamento de protoplastos fúngicos e estimativa de biomassa em processos industriais. A partir do sequenciamento do genoma de Anopheles gambiae foi obtido o gene atribuído a expressão de quitinase, de maneira que através de síntese química esse gene foi clonado em Escherichia coli (linhagem DH5α), e integrado ao genoma de Pichia pastoris nos vetores de expressão pPIC9 e pPICPGK. A atividade enzimática de 19 clones foi confirmada por análise do halo de degradação de quitina coloidal, e após a seleção foi realizada produção submersa em frascos agitados e caracterização bioquímica da enzima por delineamento central composto rotacional (DCCR). A clonagem e obtenção de vetores de expressão recombinantes foi consolidada de maneira que a integração ao genoma da levedura apresenta nível significante de expressão, na atividade enzimática fatores como tempo de incubação e temperatura não revelaram significância, e o fator pH se demonstrou com reposta positiva em faixas mais acídicas.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia},
 	note = {Instituto de Ciências Biológicas}
}